自誘導TB培養(yǎng)基Terrific Broth

Autoinductive Terrific Broth產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品描述：

自動誘導超級肉湯(Autoinductive Terrific Broth)也稱自動誘導TB培養(yǎng)基，用于Lac啟動子驅(qū)動的大腸桿菌重組蛋白表達，無需添加IPTG。自誘導TB培養(yǎng)基能夠獲得高細胞密度，蛋白表達率高出IPTG誘導過程好幾倍。

工作原理：

Terrific Broth 由LB培養(yǎng)基改進而來，目的是獲得高密度細胞。E. coli在該培養(yǎng)基中生長速度快于其在LB培養(yǎng)基或 2x YT肉湯中的生長速度。使用TB培養(yǎng)基還可以獲得高產(chǎn)量質(zhì)粒DNA和重組蛋白。

通常，外源蛋白在細菌中表達時常使用IPTG誘導的啟動子，如Lac啟動子。當細胞密度達到理想值時，通過向培養(yǎng)基中加入IPTG的方法誘導蛋白表達。使用這個自動誘導培養(yǎng)基，不再需要監(jiān)測細胞密度和添加IPTG。葡萄糖作為半乳糖操縱子的阻遏因子阻止細菌利用α-乳糖，而被優(yōu)先代謝，促進高密度生長。一旦培養(yǎng)基中的葡萄糖被耗盡（通常發(fā)生在對數(shù)期的后期），乳糖被?-半乳糖苷酶轉(zhuǎn)換成異乳糖（葡萄糖-1,6-半乳糖），而后者作為IPTG誘導型啟動子的誘導劑，引起乳糖阻遏子從與DNA結合的位點上釋放，啟動重組蛋白的表達。對于DE3基因型的E.coli中，異乳糖使T7lac啟動子去阻遏，并誘導lacUV5啟動子表達T7 RNA聚合酶。通過這種方式，在細菌培養(yǎng)物生長到某一特定點時蛋白表達自發(fā)開始，去掉了監(jiān)測細胞密度（OD600）和添加IPTG這兩個步驟。與傳統(tǒng)IPTG誘導的蛋白表達過程相比，使用自動誘導培養(yǎng)基極大地方便和簡化了試驗流程。另外還便于多克隆分析，如藍白斑篩選。

該培養(yǎng)基中含有理想比例的葡萄糖和α-乳糖作為碳源和能量來源。胰蛋白胨提供氮源、維生素、礦物質(zhì)和氨基酸，這些營養(yǎng)成分是細胞生長所必需的。酵母提取物是豐富的B族維生素來源。Studier salts為細菌細胞的生長提供最佳的生理環(huán)境。

配方與配制方法

1. 稱取55.55g 脫水培養(yǎng)基粉末，用1L去離子水加熱溶解。
2. 煮沸1min。
3. 115°C 滅菌20min。

不要過度加熱，避免乳糖分解和培養(yǎng)基顏色加深。冷卻后保存在2-8oC，如果不染菌，可以保存2個月左右。